研究背景与挑战
急性髓系白血病是一种极具侵袭性的血液系统恶性肿瘤，尤其是老年患者对现有CAR-T疗法的耐受性和疗效持久性往往不佳。自然杀伤细胞（NK细胞）凭借其低毒性和强抗肿瘤潜力，成为异基因免疫治疗的热门方向。然而，传统CAR-NK细胞疗法存在"自相残杀"问题，即部分NK细胞自身表达CD33抗原，导致CAR-NK细胞误伤同类，严重影响细胞扩增能力和治疗效果。
创新技术与方法
研究团队设计了一种全新的"CD33-MSLN环形CAR"结构，通过特定linker序列将抗CD33和抗MSLN的单链抗体片段以环形方式串联，形成独特的双靶点识别结构。这种设计不仅能同时识别肿瘤细胞表面的CD33和MSLN抗原，避免单靶点治疗中的抗原逃逸问题，还展现出比串联CAR更优的信号传导效率和肿瘤杀伤能力。
为进一步解决"自相残杀"问题，研究团队利用CRISPR/Cas12i基因编辑技术，在人多能干细胞中敲除CD33基因，建立了CD33基因敲除的hPSC细胞系，并成功诱导分化出CD33基因敲除的环形CAR-iNK细胞。
实验成果与验证
实验结果显示，表达环形CAR的NK细胞对同时表达CD33和MSLN的AML细胞系及患者原代AML细胞的杀伤能力显著优于单靶点CAR-NK细胞。单细胞RNA测序分析表明，环形CAR能更有效地激活NK细胞的抗肿瘤功能，相关信号通路和基因表达水平显著上调。
在动物模型实验中，CD33基因敲除的环形CAR-iNK细胞展现出优异的抗肿瘤效果。在HL-60细胞异种移植模型中，治疗组小鼠肿瘤负荷显著降低，中位生存期延长至42天；在患者来源异种移植（PDX）模型中，治疗组小鼠中位生存期达到46天，显著优于对照组。
临床意义与前景
该研究同时解决了CAR-NK细胞疗法中的两个核心问题：通过环形CAR设计实现双靶点精准杀伤，通过基因敲除消除自相残杀。这一方案在体外实验和动物模型中展现出优异的安全性和有效性，具备重要的临床转化潜力。
人多能干细胞来源的iNK细胞可大规模标准化制备，基因编辑技术能确保细胞质量稳定，为开发"现成可用"的AML免疫治疗产品奠定了基础。该疗法特别适合CD33和MSLN双阳性的AML患者，尤其是老年患者或对传统化疗、CAR-T疗法不耐受的患者。
研究团队表示，未来将进一步优化CAR结构，探索联合其他免疫检查点抑制剂的治疗方案，并开发能上调肿瘤细胞MSLN表达的小分子药物，以扩大疗法适用范围。这项研究为血液系统恶性肿瘤的免疫治疗开辟了新的方向，有望为更多AML患者带来生存希望。
